熒光光譜儀又稱熒光分光光度計(jì),是一種定性、定量分析的儀器。通過熒光光譜儀的檢測,可以獲得物質(zhì)的激發(fā)光譜、發(fā)射光譜、量子產(chǎn)率、熒光強(qiáng)度、熒光壽命、斯托克斯位移、熒光偏振與去偏振特性,以及熒光的淬滅方面的信息。接下來一六儀器詳細(xì)說說熒光光譜儀。
熒光光譜儀主要包括光源、激發(fā)單色器、樣品池、熒光單色器及檢測器等主要部件。
1.光源
早期的熒光分光光度計(jì),配有能發(fā)生很窄汞線的低壓汞燈。使用高壓汞燈,譜線被加寬,而且也存在高強(qiáng)度的連續(xù)帶。然而,一個(gè)完整的激發(fā)光譜的測定需一種能發(fā)射從可見到紫外范圍的較高強(qiáng)度的光輻射的燈。氙弧燈能適于此條件,因此,它是目前在熒光分光光度計(jì)中廣泛使用的光源。
2.單色器
單色器的作用是把光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解成單色光,并能準(zhǔn)確方便地“取出”所需要的某一波長的光,它是光譜儀的心臟部分。單色器主要由狹縫、色散元件和透鏡系統(tǒng)組成,其中色散元件是關(guān)鍵部件。色散元件是棱鏡和反射光柵或兩者的組合,它能將連續(xù)光譜色散成為單色光。
3.樣品池
熒光儀用的樣品池需用低熒光的材料制成,通常用玻璃和石英材料,形狀以方形和長方形為宜。
4.檢測器
主要有硒光電池、光電管和光電倍增管等。目前來說由于熒光的強(qiáng)度較弱,一般以光電倍增管作檢測器。選擇光電倍增管要考慮響應(yīng)波長、靈敏度和噪聲水平等。藍(lán)敏管對蛋白質(zhì)、核酸的測量適用,而紅敏管則適用于熒光染料檢測。